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2022年10月3日
普通生理学杂志
Noyer, L;Wang YH;Tao, AY;李伟;Zhu, J;Saavedra, P;Hoda, ST;
产品:百日咳毒素b .百日咳，缓冲液冻干
运算单元
在第0天和第2天，小鼠腹腔注射200 ng百日咳毒素(猫。no.180;生物实验所一览表)．每2 d对小鼠进行EAE症状评估。根据以下临床评分系统分析EAE的严重程度……
2022年10月1日
分子医学报告
刘乙;毛，Z;尹，N;顾，Q;顾，Q;齐，Y;李，X;杨，H;吴，Z;邹，N;英，S;万，C;
产品:百日咳毒素b .百日咳，缓冲液冻干
试剂
百日咳毒素从生物实验室列表．
EAE的诱导
mog35 -55诱导的C57BL/6小鼠EAE的建立如前所述(11-13)。简单地说，小鼠在第0天皮下注射含有cfa的结核分枝杆菌H37Rv菌株乳化的MOG35-55 150 mg免疫。注射量设定为150 μ l。之后，每只老鼠额外摄入了300纳克的PTX免疫后第0天和第2天腹腔注射100ml磷酸盐缓冲盐水(PBS)。.．.
作者没有具体说明使用的是哪一个百日咳毒素清单实验室。List Labs提供以下百日咳毒素产品:
•产品号180 -百日咳毒素b .百日咳，缓冲液冻干
•产品号181 -百日咳毒素b .百日咳，冻干(无盐)
•产品号179A -百日咳毒素b .百日咳(甘油)
产品:百日咳毒素b .百日咳，缓冲液冻干
.．.百日咳毒素购买自生物实验室名单美国(CA)。.．.
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产品:百日咳毒素b .百日咳，冻干(无盐)
运算单元
百日咳注射溶液(每只老鼠)
试剂原浓度终浓度量
百日咳100 μg/mL 2 μg/mL 2 μL
百日咳毒素生物实验室清单第181号
产品:百日咳毒素b .百日咳，缓冲液冻干
0.1mL PBS含200ng百日咳毒素(生物化验所名单)每只小鼠在免疫后第0天和第2天静脉注射。.．.
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产品:百日咳毒素b .百日咳，缓冲液冻干
酶联免疫吸附测定法
酶联免疫吸附试验(elisa)用于评估抗原和抗体构象和功能完整性。简单地说，96孔胶粘板(康宁)被涂上RTX或百日咳毒素(名单化验室)分别用0.5 μg/mL的hepes缓冲盐水和10 mM钙(HBSC)或0.2 μg/mL的PBS在4°C下过夜。.．.
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产品:ULTRA PURE LPS来自大肠杆菌O111: B4
2.1.细胞培养和处理
haec是从龙沙购买的。细胞生长在37℃的EGM BulletKit®−2(龙沙)中，5%的CO2和95%的空气。培养基完全按照供应商(龙沙)的推荐配制。融合细胞暴露于100ng /ml的环境中有限合伙人（大肠埃希菌O111:B4，生物实验室，#421)，为期0.5小时至24小时，详情见图例。所有实验均采用第三代细胞。
产品:霍乱毒素B亚基(类霍乱毒素)霍乱弧菌低盐环境下
2.2.动物群体和手术准备
本研究共使用63只动物，分为9组:对照组(n = 4)、假手术组(术后1 h (n = 6)、1 d (n = 7)、3 d (n = 7)、c2损伤组(术后1 h (n = 8)、1 d (n = 8)、3 d (n = 8)、7 d (n = 8))。c2伤的动物都没有在手术中或术后死亡，但有一只Sham动物在1小时内因技术问题死亡。所有动物(每组4只除外)均接受逆行示踪剂胸膜内注射霍乱毒素B片段（CTB，列出生物制剂， Campbell, CA, USA)来识别颈脊髓中的膈肌运动神经元，类似于之前描述的[41,42,43,44]。简单地说，每只大鼠都用异氟烷麻醉(Iso-vet, Piramal, Voorschoten, Netherlands;~1.5% O2)，取仰卧位放在手术台上，同时对着口罩自主呼吸。胸腔的外侧被刮平并轻轻触诊以确定腋窝前线的第五肋间间隙。用消毒过的26G针连接50 μL的汉密尔顿注射器，注射25 μL的0.2%施(溶解在无菌注射盐水中)在第5和第6肋骨之间进入每一侧的胸膜间隙。.．.
2022年8月24日
粘膜免疫
山崎，S;野原，N;大村屋，M;恒冈，Y;矢田，H;片泷，T;西那，T;三上，T;船户，H;
产品:来自大肠杆菌O111: B4
试剂
得到的试剂如下:…脂多糖(生物实验室名录，大肠杆菌O111:B4),……
产品:来自大肠杆菌O55: B5
2.1.软骨细胞分离和培养
将样品置于含有硫酸庆大霉素(50mg /l)和两性霉素B (250 μg/ml)的无菌盐水(0.9% NaCl)溶液中。软骨样本被冷冻运输(约。5°C)到实验室。软骨细胞的分离和扩增如前所述(Ley等人，2011年)。简单地说，将软骨细胞扩展到传代1，然后以20,000细胞/cm2的速度在软骨形成培养基中进行种子培养，以维持表型。第4天，细胞被刺激有限合伙人(10 ng / ml,大肠埃希菌055:B5;生物实验室名单， Campbell, CA, USA)或保持24小时不处理(对照组)。细胞生长到融合并在第5天收获，立即冷冻并在−80°C保存，直到进一步分析。
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